PHD theses : Medical Laboratory Science

Permanent URI for this collectionhttps://repository.neelain.edu.sd/handle/123456789/496

Browse

Filter results by typing the first few letters
Now showing 1 - 1 of 1
  • Thumbnail Image
    Item
    Telomere Length, human Telomerase Reverse Transcriptase (hTERT) Level, CD38, and ZAP-70 in relation to Clinical and Hematological Parameters in Sudanese Patients with Chronic Lymphocytic Leukemia
    (Neelain University, 2019) Ameen Abdulaziz Mohammed OmerBasbaeen
    Abstract Background: As the clinical course of Chronic Lymphocytic Leukemia patients is very heterogeneous, the search for reliable prognostic markers that could predict disease progression and clinical outcome at an early stage of the disease is of great importance.Human Telomerase Reverse Transcriptase protein is the rate limits of telomerase enzyme. Many studies showed a correlation between hTERT mRNA expression with clinical aggressiveness, also used as a prognostic indicator in CLL. This study aimed to determine Telomere Length, human Telomerase Reverse Transcriptase (hTERT) Level, CD38, and ZAP-70 in relation to Clinical and Hematological Parameters in Sudanese Patients with Chronic Lymphocytic Leukemia. Material and methods: A cross-sectional descriptive study was conducted in Khartoum state, Sudan, involved 110 CLL patients and 50 healthy volunteers who selected for molecular analysis as a control group. Physical examination, Complete Blood Count and Immunophenotype were performed in all patients to confirm the diagnosis. Clinical staging such as Rai and Binet were studied. CD38 and ZAP70 were performed by Flow Cytometry. human Telomerase Reverse Transcriptase(hTERT) protein level was assessed by Flow Cytometry (EPICS XL Beckman Coulter Flow Cytometer, Miami, FL, USA) and using primary polyclonal antibody (BioVision-USA). Genomic DNA was extracted from all blood samples by using Blood DNA Extraction Kit (ANALYTIKJENA-Germany), telomere length was assessed byquantitative real-time PCR (qRT-PCR) (Sacace Biotechnologies, Como, Italy). Results: In this study, 79(71.8%) were male and 31(28.2%) were female (M/F ratio, 2.55), and the mean age at the time of diagnosis was 62.97 years. Lymphadenopathy, Splenomegaly, Hepatomegaly, Leukocytosis, thrombocytopenia, and anemia were seen in 78(71%), 54(49%), 14(13%), 67(60.9%), 43(39%) and 38(34.5%) of patients respectively. About 90% of patients displayed an advanced Rai risk stage (41.8% were Intermediate-Risk and 49.1% were high risk) and 70% were at Binet stage B or C. On the other hand, CD38 and ZAP-70 were expressed in 41(37.3%) and 36(32.7%) of patients respectively.Combined expressions of both ZAP-70 and CD38 occurred in 20(18.2%)patients, 53(48.2%)patients wereexpressed ZAP-70-/CD38- and 37(33.6%)patientshad either ZAP-70+ or CD38+.hTERT expression was determined in a total of 110 CLL samples, the overall mean expression level was 77.29±30.57 (range 0.1%-99.5%), whereas, hTERT Mean Fluorescence Intensity (MFI) expression a mean of 3.75±2.14 with a range of (0.78-10.20). There was a significant and positive correlation between TERT percentage and MFI. hTERT was expressed in 97(88.2%) of patients showed a high level of hTERT protein above the cut off value. The mean age of the patients was significantly higher among hTERT-positive patients than hTERT-negative. A significant association was found between hTERT percentage expression and the advanced B/C Binet stage as well as older age.The Telomere length was significantly shorter in CLL patients than in healthy controls. Furthermore, there was a significant and negative correlation between hTERT protein level expression and TL. Regarding median Telomere length, the WBCs and ALC were significantly high in patients with short telomere length. Telomere length was significantly shorter in cases with a CD38 positive. Significantly associations were encountered between high hTERT/short telomere and advance B/C Binet stage, high WBC counts, high ALC, and high B lymphocyte counts. Conclusion: hTERT protein levels tend to be higher in the advancedBinet stage as well as an older age. Telomeres were significantly shorter in CLL patients compared to healthy control. The shortening of TL was associated with high hTERT protein level expression. Demographic characteristics influences have no effect on TL in CLL patients. TL was correlated with activation/proliferation marker such as CD38 expression in CLL cells. المستخلص مقدمة: نظرًا لأن الدورة السريرية لمرضىسرطان الدم الليمفاوي المزمنCLL غير متجانسة للغاية، فإن البحث عن علامات نذير موثوقة يمكن أن تتنبأ بتطور المرض والنتائج السريرية في مرحلة مبكرة من المرض له أهمية كبيرة. بروتبن التيلوميراز العكسي البشري هو المحدد الاساسي لفعالية أنزيم التيلوميراز. هناك عدة دراسات لاحظت وجود علاقة بين تعبير التيلوميراز العكسي البشري معا العدوانية السريرية، وأيضا يستخدم كامؤشر نذير عند مرض سرطان الدم اللمفاوي المزمن.هدفت هذه الدراسة تحديد طول التيلومير ومستوى التيلوميراز العكسي البشري و CD38 وكذلك ZAP70 وعلاقتهم بالمؤشرات السريرية والدموية في المرضى السودانيين المصابين بسرطان الدم الليمفاوي المزمن. المواد والطرق :أجريتهذةالدراسة الوصفية المستعرضة في ولاية الخرطوم،جمهورية السودان، وشملت عينة الدراسة 110 من مرضى.CLL وتم إجراء الفحص السريري وتعداد الدم الكامل ونمط المناعة في جميع أفراد العينة لتأكيد التشخيص. بعد ذلك صُنف المرضى حسب تصنيفRai وBinet. ثم قياس مؤشرات النذير CD38 و ZAP70 بواسطة التدفق الخلوي. وعلاوة على ذلك أجري تقييم مستوى بروتين hTERTباستخدام الأجسام المضادة الأولية (BioVision-USA) بواسطة التدفق الخلوي.(Flow Cytometry) ولقياس طول Telomere تم أخذ عينات الدم من مرضى CLL 110 وفي المقابل أخذت 50 حالة لاشخاص سليمين كعينة مراقبة وأستخلص الحمضالنووي الريبي منقوص الأكسجينباستخدام (Blood DNA Extraction Kit-(ANALYTIKJENA-Germany، وتم قياس طول Telomere بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي .(qRT-PCR) النتائج :أظهرتنتائج أن عدد الذكور 79 بنسبة (71.8٪)، بينما الإناث 31 بنسبة (28.2٪)، وترواح معدل الذكور الى الإناث 2.55. وكان متوسط العمر لجميع العينات 62.79 عاما.وأوضحت نتائج التشخيص الأولي أن عدد78 مريض كان لديهم تضخم في العقد اللمفاوية بنسبة (71 ٪)، وأن 54 مريض كان لديهم تضخم في الطحال بنسبة (49 ٪)، وأن 14 مريض كان لديهم تضخم في الكبد بنسبة (13 ٪)، وأن 67 مريض كان لديهم زيادة في عدد كرات الدم البيضاء بنسبة (60.9 ٪)، وأن43 مريض كان لديهم نقص في الصفائح الدموية بنسبة (39 ٪)، وأن 38مريض كان لديهم فقر دم بنسبة (34.5 ٪). وفيما يخص تصنيف المرضى اعتمادا على تصنيف Rai أظهرت النتائج أن 90٪ من المرضى كانوا في مراحل متقدمة (41.8٪ كانوا في مرحلة متوسطة من الخطورة و 49.1٪ في مرحلة متقدمة من الخطورة). أما التقسيم حسب تصنيف Binet فكان 70٪ من المرضى في المراحل B وC . ومن ناحية أخرى أظهر 41 (37.3 ٪) و 36 (32.7 ٪) من المرضى مستوى عالي منCD38 و ZAP-70على التوالي. وبينت نتائج التعابير المجمعة ل CD38 وZAP-70وجود ثلاث مجموعات (ZAP-70+/CD38+، ZAP-70-/CD38-، إما ZAP-70+ أو CD38+) بنسب (18.2٪، 48.2٪، 33.61٪) على التوالي. وتم قياس بروتين hTERT في جميع مرضىCLL ، وكان متوسط مستوى بروتين hTERT 77.29٪ (المدى 0.7 ٪ - 99.5 ٪.(بينما كان متوسطhTERT MFI 3.75 (المدى 0.78-10.20).وظهر ارتباط إيجابي بين نسبةhTERT وقيمة.MFI وأظهر 97مريضمانسبتة (88.2٪) مستوى عال من بروتينhTERT أعلى من قيمة القطع.كان متوسط عمر المرضى أعلى بكثير بين مرضى hTERT الإيجابي مقارنة بسلبية.hTERTووجد أن هناك علاقة ذات دلالة إحصائية بين نسبة وجود بروتين hTERT وتصنيف BinetB وC وكذلك العمر. أيضالوحظ أن طول Telomere أقصر بكثير في مرضى CLL مقارنة بالعينة المراقبة وكان الفارق ذو دلالة احصائية. وعلاوة على ذلك كان هناك ارتباطاً عكسياً ذو دلالة احصائية بين تعبير مستوى بروتين hTERT وطول.Telomereكانت خلايا الدم البيضاء الكلية وعدد الخلايا اللمفاوية المطلقة عاليةً بشكل ملحوظ في المرضى الذين كان لديهم قُصرفي طول الTelomere. حيث كان طول Telomere أقصر بكثير في الحالات التي كانت فيها CD38 إيجابية. إذ لا توجد علاقة ذات دلالة إحصائية بين طول Telomere ووجودZAP-70وكذلك التعبيرات المدمجة لكلا المؤشرين ZAP-70/CD38.تمت ملاحظة ارتباطات كبيرة بين High HTERT/short telomere والمراحل المتقدمة من تصنيف Binet وزيادة عدد كرات الدم البيضاء وكذلك ارتفاع عدد الخلايا اللمفاوية المطلق، وعدد الخلايا اللمفاوية B. خاتمة :تشير هذه البيانات إلى أن مستوى بروتينhTERT قد يلعب دورًا مهمًا في بيولوجياCLL ، ويميل مستوى البروتينhTERT . إلى أن يكون أعلى في مرحلةBinetالمتقدمة بالإضافة إلى تقدم السن ويعد قصرTelomere أحد الخصائص الشائعة لسرطان الدم اللمفاوي المزمن.وهناك ارتباط بين طول Telomereوزيادة بروتين.hTERT كذلك لا تؤثر الخصائص الديموغرافية على طول Telomere لدى مرضى .CLLوهناك ارتباط وثيق بين طول Telomere وعلامات زيادة التحفيز والتكاثر مثل مؤشر النذير CD38في خلاياCLL.