Study on the antimicrobial activity of lactobacillus bulgaricus Extract against some pathogenic bacteria

Abstract

Abstract Probiotics have been used since the earliest years as food components for human and animal, without induce any side effects on both. They have been agreeable because they found naturally in the intestinal tract of healthy humans. The aim of this study was to determine the presence of antibacterial activity among from Lactobacillus bulgaricus isolated from Sudanese yoghurts against some common bacterial pathogens. The selected pathogenic bacteria were Staphylococcus aureus, E. coli, Pseudomonas aeruginosa and Salmonella typhimurium. The identification of the bacteria was carried according to the standard techniques. Lactobacillus bulgaricus was isolated in De Man Rogosa and Sharp agar media(MRS) at 37°C for 24h under anaerobic condition, overnight MRS broth culture of the lactobacillus was centrifuged at 6000 rpm for 15 min and the supernatant was filtrated through a 0.22μm pore size cellulose acetate filter in order to get cell free supernatant. Dilutions of 106, 107, 108, 109, 1010 were used to study the antimicrobial activity against tested pathogenic bacteria. The turbidity of the broth cultures was adjusted to equal that of 0.5 MacFarland and the antimicrobial activity of lactic acid bacteria extract was evaluated by agar well-diffusion assay and disc diffusion method using both Mueller and Hinton agar and nutrient agar, the activity of Lactobacillus extract was compared with the activity of gentamicin (10 mg), cephalexin 30μg and trimethoprim 25µg. All tested microorganisms shown clear zones of inhibition with the extract of Lactobacillus bulgaricus, the largest zone of inhibition was shown with dilution of 106 the size of inhibition zones were decreased gradually at higherdilutions, the lowest inhibition zones were observed at 1010 dilution of Lactobacillus extract with all tested bacteria. The results showed that there is slightly variation in the size of the inhibition zones that developed from the same dilution at well and disc diffusion methods. The disc diffusion method gave larger inhibition zones for dilutions of 106, 107, 108, 109 and 1010 with Staphylococcus aureus comparing with the well methods, on the other hand the disc diffusion method showed relatively larger inhibition zone with Pseudomonas aeruginosa and Salmonella typhimurium comparing with well diffusion technique. It was clear that the Lactobacillus bulgaricus extract gave the highest inhibition zones with Staphylococcus aureus while the lowest inhibition zones were obtained with Pseudomonas aeruginosa. The antimicrobial activity of dilutions of 106, 107, 108, 109and 1010 were compared with the antimicrobial activity of gentamicin (10 mg), cephalexin 30μg and trimethoprim 25µg. In this study it was concluded that Lactobacillus bulgaricus has antimicrobial activities against Pseudomonas aeruginosa and Salmonella typhimurium, E. coli and Staphylococcus aureus. The activity of the bacteria extract was decreased with increasing of the dilutions and the best activity was shown with dilution of 106on the other hand this dilution was more active against all testes bacteria comparing with gentamicin 10mg and cephalexin 30μg.

مستخلص: المكونات الغذائيه للانسان والحيوان دون احداث البروبايوتك استخدمت منذ السنوات الاولي كمكون غذائي للانسان والحبوان دون احداث اب تاثبر وجود نشاط مضاد للجراثيم السودانين والزبادي ضد بعض الجراثيم البكتيريه.في البيئه الغذائيه دي مان ريجوزا ان شارب اجار في درجه حراره مئوية لمده 24 ساعه تحت حاله لاهوائيه . تم الطرد المركزي لبيئه سائله من المعصوبات اللبنيه عند 6000 دوره في الدقيقه لمده 15 دقيقه وتمت ترشيح الماده من خلال ورقه ترشيح ذات مسام 0.22 ميكروميتر استيتات السليلوز من اجل الحصول علي خلايا خاليه من العالق . التخفيفات 1010 109 108 107 106 استخدمت لدراسه النشاط التضادي ضد البكتيريا الممرضه المختبره ،نظمت عكاره الغذاء السائله لتعادل 0.5 مكفارلاند والنشاط التضادي لمستخلص اللاكتك اسد قيم بطريقه الانتشار بحفر الاجار والاقراص باستعمال مولر هينتون اجار والاجار المغذي .قورن نشاط مستخلص المعصوبات اللبنيه مع نشاط جينتا مايسين 10 مجم وسيفاليكسين 30 مايكروجرام وترايميسوبريم25 مايكروجرام . اظهرت كل الميكروبات المختبره مناطق المنع مع مستخلص المعصوبات اللبنيه اكبر منطقه للمنع ظهرت مع تخفيف 106 وحجم المنع قل تدريجيا في التخافيف العليا اقل منطقه منع ظهرت مع تخفيف 1010 من مستخلص المعصوبات اللبنيه مع كل البكتيريا المختبرهاظهرت النتايج ان التباين في حجم المنع التي قد نشات في المناطق من نفس التخفيف بطريقه الانتشار بالحفر والقرص . طريقه الانتشار بالقرص اعطت اكبر منطقه منع لتخافيف 1010 109 108 107 106 مع المكورات العنقوديه الذهبيه مقارنه بطريقه الحفر من جهه اخري طريقه الانتشار بالقرص اظهرت اكبر منطقه منع نسبيا مع الزائفه الزنجاريه والسالمونيلا تايفيميوريوم مقارنه بطريقه الانتشار بالحفر.ومن الواضح ان مستخلص المعصوبات اللبنيه اعطي اكبر مناطق منع مع المكورات العنقوديه الذهبيه واقل مناطق منع مع الزائفه الزنجاريه . النشاط التضادي للتخافيف 1010 109 108 107 106 قورنت مع نشاط جينتا مايسين 10 مجم وسيفاليكسين 30 مايكروجرام وترايميسوبريم25 مايكروجرام.محصله هذه الدراسه ان النشاط الميكروبي ضد المعصوبات اللبنيه والالزائفه الزنجاري والاشريكيه القولونيه والمكورات العنقوديه الذهبيه وقل نشاط المستخلص البكتيري بزياده التخفيف وافضل نشاط وجد في تخفيف 106 ومن جهه اخري وجد ان هذا التخفيف اكثر فعاليه ضد كل الميكروبات المختبره مقارنه بالجنتا مايسن10 والسيفالوكسين 30 .