The Effect of Interleukin-10 (-1082G/A) Polymorphism on Target Haemoglobin Level Achievement in End Stage Chronic Renal Failure Patients on Haemodialysis and Erythropoietin Therapy

Abstract

Abstract Background: Anemia is a common complication in patients with chronic renal failure, it mainly caused by erythropoietin deficiency, thus the management of anemia include administration of recombinant human erythropoietin to achieve a target Hb level 11-12 g/dl. Some haemodialysis patients showed resistance to EPO therapy and this due to many factors including Interleukin10 polymorphism (-1082G/A). Objective: This study aimed to investigate the effect of interleukin-10(IL-10) (-1082G/A) polymorphism on erythropoietin responsiveness in end stage chronic renal failure patients on haemodialysis. Materials and Methods: Two and half ml of venous blood samples were collected from patients with standard vein puncture and transferred into EDTA container for PCR and complete blood count. Complete blood count (CBC) was performed immediately after sample collection by automated cell analyzer (Sysmex KX-2IN, JAPAN). DNA was extracted using guanidine chloride method and stored at -20°c until PCR was performed. Allele-specific polymerase chain reaction (PCR) was used for molecular detection of Interleukin10 polymorphism (-1082G/A).PCR products were separated by electrophoresis on 2% agarose gel containing ethedium bromide and the fragments size was determined using 100 bp DNA ladder (SOLIS BIODYEN, ESTONIA) and analyzed under UV transilluminator (SYNGENE, JAPAN). Data was analyzed using statistical package for Social Sciences (SPSS), version 21. Results: According to Hb levels 16(40%) of the patients were found to have mild anaemia, 20(50%) had moderate anemia and 4(10%) had severe anemia. Moderate Normocytic Normochromic was the most frequent type of anemia. The results showed that, the GA genotype was the most frequent in both patients (25%) and control groups (21%), followed by AA (22% and 17% respectively) and GG (15% and13%respectively) genotypes. There was statistically significant (P.value= 0.026) decrease mean Hb level in patients with AA genotype compared to GA genotype, while the difference was not statistically significant with GG genotype (P.value=0.28). IL-10 (–1082 G/A) polymorphism was not associated with morphological type or severity of anemia of haemodialysis patients. Conclusion: End stage chronic renal failure patients on haemodialysis with IL-10 AA genotype had significantly lower haemoglobin level compared to GA and GG genotypes.

ملخص الدراسة الخلفية: فقر الدم من المضاعفات الشائعة لدى مرضى الفشل الكلوي المزمن، وذلك أساسا بسبب نقص الإريثروبويتين وبالتالي فإن علاج فقر الدم يشمل حقن المريض بهرمون الإريثروبويتين لتحقيق مستوى خضاب الدم 11المستهدف-12جمدل. أظهر بعض مرضى غسيل الكلى مقاومة للعلاج بهرمون الإيريثروبويتين وهذا يرجع إلى العديد من العوامل بما في ذلك تعدد شكل جين الإنترليوكين-10 (-1082ج\ا). الهدف: هدفت هذه الدراسة الى التحقق من دور تعدد شكل جين انترليوكين-10(-1082ج\ا) في الاستجابة للعلاج بالإيريثروبويتين في مرضى الفشل الكلوي المزمن الدين يعالجون بالغسيل الدموي. المواد والطرق: تم جمع خمسة ملليتر من الدم الوريدي من مرضى الفشل الكلوي الدين يعالجون بالغسيل الدموي وتم نقلها إلى حاوية ثنائي امين الإيثلين رباعي حمض الخليك لإستخدامها في تعداد الدم الكامل وتحليل تفاعل البلمرة التسلسلي. وتم إجراء تعداد الدم الكامل مباشرة بعد جمع العينات بواسطة محلل الخلايا الآلي (SYSMEX KX-2IN). تم استخلاص الحمض النووي الرايبوزي منزوع الأوكسجين(DNA) باستخدام طريقة كلوريد القوانيدين وتخزينها في درجة حرارة- 20ْمئوية لحين إجراء تفاعل البلمرة المتسلسل. تم استخدام تفاعل البلمرة المتسلسل للكشف عن تعدد الأشكال الجينية لانترليوكين-10 . وقد تم تحليل المنتجات الناتجة عن طريق جهاز الفصل الكهربائي على 2٪ هلام الأغاروز تحتوي على بروميد الاثيديوم وتم تحديد حجم شظايا باستخدام bp 100 من سلم الحمض النووي (SOLIS BIODYEN, ESTONIA) وتحليلها تحت الأشعة فوق البنفسجية (SYNGENE, JAPAN). ثم تم تحليلها باستخدام الحزمة الإحصائية للعلومات الاجتماعيهالنسخة21. النتائج:أظهرت النتائج أن النمط الوراثي (GA) كان الأكثر شيوعا في كل من المرضى والمجموعات الضابطة، تليها أنماط AA و GG بالتالي كان هناك انخفاض في متوسط مستوى خضاب الدم في المرضى الذين يعانون من النمط الوراثي AA مقارنة مع النمط الوراثي GA و GG، ولكن الفرق كان ذو دلالة إحصائية مع (AG). وكان متوسط عمر المرضى 46.2 سنة. تعدد الأنماط الجينية لإنترليوكين -10 -1082ج\أ لا يرتبط مع نوع أو شدة فقر الدم لدى مرضى غسيل الكلى. الخلاصة:على حسب مستوى خضاب الدم (40%) من مرضى الفشل الكلوي المزمن الدين يعالجون بالغسيل الدموي لديهم انيميا طفيفة (50%) لديهم انيميا متوسطه و(10%) لديهم انيميا حادة. كان النمط الوراثي (AA) أقل مستوى هيموغلوبين مقارنة مع الأنماط الجينية GA و .GG